【摘要】 目的：葛根素注射液的变色、pH值快速下降、过敏反应发生率高、三大质量问题严重影响了该品种的生产和使用，必须加以研究解决。方法：分析了各种问题产生的原因，确定了解决办法。结果：按新方法制备的成品，全部解决了上述质量问题。结论：改进后生产的成品质量稳定可靠，使用更加安全。
【关键词】 葛根素注射液 药液变色 pH值快速下降 过敏反应 问题研究
葛根素是由中药材葛根中提取的有效成份，是一种黄酮类化合物。主要用于：冠心病、心脑血管疾病，视网膜动、静脉阻塞，突发性耳聋等疗效较好。制备葛根素注射液(5ml：200mg)的原料，国内使用纯度98%以上的化学合成品。几年前葛根素注射液市场异常火爆，多家研发机构火速申报，几十家生产企业纷纷投产。随着成品贮存期的延长，临床使用量加大，各种问题逐渐显现，该品种又成了媒体声讨的对象。葛根素注射液的质量问题如不研究解决，该品种就不能继续生存下去。
1 实验药品与仪器
小容量注射液生产线(通过国家GMP认证);酸度计PP-15(北京赛德利斯);葛根素原料药(注射级，烟台鲁银药业公司，批号：040407);乙二胺四乙酸二钠(批号：031104);焦亚硫酸钠(批号：031017);活性炭(注射级，批号：040905);丙二醇(注射级，美国陶氏化学公司，批号：040407)。
2 方法与结果
2.1 研发处方 葛根素40g、丙二醇500ml、活性炭5g，制成1000ml。
2.2 研发生产工艺 取丙二醇500ml，升温至65～75℃，称取葛根素原料40g，溶于丙二醇中搅拌至全溶，取注射用水400ml加入药液中混均，按容量称取0.05%(g/v)活性炭，搅拌吸附30分钟，过滤，定容，测pH值，精滤分装。100℃，30分钟灭菌，即得。
2.3 葛根素注射液存在的主要质量问题及原因分析
2.3.1 贮存过程中药液变色及原因分析 葛根素注射液刚下线的成品外观为无色澄明液体或微黄色澄明液体，同批色泽均匀一致。但在贮存1个多月后有部分药支变为黄色，之后随着时间延长变色药支出现率不断增加(当药液变为黄色时，变色的药液pH值也下降至3.7以下)。药液部分变色导致了同批药液色泽不一致，外观性状不符合规定。
分析认为：葛根素属一种黄酮类化合物，能被一些2～3价的金属阳离子催化，发生反应，由无色的药液变成有色的二氢异黄酮类物质。注射用水，配制管线，设备，金属离子很少，内包装物安瓿不同支之间可能存在金属离子分布不均匀的个体差别，因此导致个别药支在贮存1～3个月内完全变成黄色，且先变色的药支变色较深。
不仅金属离子催化导致变色，安瓿内的残氧量也会与葛根素发生反应。导致葛根素发生氧化，生成有色的黄酮衍生物，氧化作用是缓慢发生的，由于各个安瓿内的含氧量不同，氧化反应进程不同。因此，各药支之间产生了不一样的色差，导致了安瓿间的色差深浅不一致。
2.3.2 贮存过程中pH值快速下降的原因分析
葛根素注射液标准规定成品pH值合格范围3.5～5.5，研发工艺在配制时按惯例将pH值控制在4.5±0.1中限，灭菌后下降约0.3～0.4，贮存时先变黄的药支pH值均降至3.7以下，6个月后其它色泽较浅的药支也下降至3.9以下。PH值的快速下降，表明葛根素注射液药液内部没有达到稳定体系，化学反应一直在运行，各种反应产物呈酸性，造成了pH值快速下降，可以认为pH在5.0 以下药液稳定性欠佳。
2.3.3 临床应用中过敏反应发生率较高，反应严重及原因分析
根据国内几年间发表的资料表明，葛根素注射液临床应用时过敏反应发生率较其它注射液品种高，有时还很严重。研发处方虽无严重过敏反应病例出现，但过敏反应出现率也达5～6%。
葛根是一种常用中药材，毒副作用小，已有几千年的应用历史，没有能导致严重过敏反应的记载。葛根素注射液中，金属离子催化的变色反应，贮存中的氧化反应所产生的各种黄酮衍生物质，应是真正的致敏物质。如果注射液中药液是一个稳定体系，不发生各类反应，少产生与主药不同的其它物质，就会降低过敏反应发生率，同时减轻过敏反应的程度。
2.4 具体实施的改进措施
2.4.1 处方、工艺改进的思路 质量稳定，使用安全的药品是通过正确的处方，合理的工艺制造出来的，不是检验出来的，更不是外行能监管出来的。尽管葛根素注射液质量问题严重，但只要通过技术改进使其药液达到一个稳定状态，就能解决变色、pH值快速下降问题。化学反应物质生成的减少，必然能降低过敏反应的发生，使临床使用更安全。
2.4.2 控制部分药支变色的措施
2.4.2.1 在葛根素处方中添加辅料乙二胺四乙酸二钠，做为稳定剂。用量为千分之0.2(g/v)使它与安瓿内壁分解出的微量金属离子络合，阻止金属离子对主药的催化变色反应发生。
2.4.2.2 在葛根素处方中添加辅料焦亚硫酸钠，做为抗氧剂，阻止主药的氧化反应进程，使药液最终成为一个稳定的体系。
2.4.3 控制pH值快速下降的措施
2.4.3.1 合理的确定焦亚硫酸钠的加入量。药剂学中焦亚硫酸钠的使用量为2‰～3‰。如果抗氧剂加入量大，会使药液在贮存过程中pH值波动加大，不利于稳定体系的形成。如抗氧剂加入量不足，阻止不了氧化反应进程，仍可生成黄酮衍生物质，产生过敏反应，色差等问题。经过试验筛选，加入量确定为1.5‰，此时体系最稳定。药液在贮存期二年内始终为无色。如抗氧剂采用亚硫酸氢钠，药液则为微黄色。
2.4.3.2 适当上调pH值 葛根素pH值控制目标，成品贮存二年后pH值应高于5.0，尤其考虑到抗氧剂加入后，抗氧剂与氧气反应可生成酸性物质，因此决定上调pH值至5.5上限。贮存中使成品在5.4～5.0弱酸条件下小幅波动。
2.4.4 控制过敏反应的措施
抗氧剂 络合稳定剂的使用使变色反应得到控制，药液不再变色。使pH值稳定主药葛根素分解成其它过敏物质的机会大大减少了，过敏反应会随之降低，过敏反应的程度会随之减弱。
2.5 研究结果
2.5.1 改进后的处方 葛根素40g，丙二醇500ml，EDTA-二钠0.2g ，焦亚硫酸钠1.5g，活性炭5g，制成1000ml。
2.5.2 改进后的生产工艺 取丙二醇500ml，加水200ml，升温至65℃左右，称取葛根素40g，溶解完全，另取100ml水，加入焦亚硫酸钠1.5g，EDTA-二钠0.2g搅拌至全溶后，加入药液中，混匀。加入活性炭，搅拌吸附30分，过滤脱炭，定容，调节pH值至5.4～5.5之间，精滤分装，100℃，30分钟灭菌，即得。
2.5.3 改进后的成品与研发成品问题指标对比观察 将研发工艺生产的成品及其产生部分变色，pH值下降，过敏反应问题指标与改进工艺后的成品这三项指标做一对照观察，结果见表1。表1 葛根素研发成品与改进后成品问题指标对比(三批综合)
3 讨论
3.1 药品研发单位工业生产经验不足，通过市售药品成份的测定来反推确定新药处方组成，制定生产工艺是万万要不得的研发方式。应在正确的理论指导下，拟定处方、生产工艺。
3.2 药品生产企业，应该积极参与已委托给研发单位的新药研制工作，尤其在辅料确定，生产工艺确定方面。否则，新药投产就会有大错误出现，再进行适合工业生产的改进后再申报，就会有很大麻烦。