农业论文代理苦荞浸泡酒中总黄酮的测定

　　摘要：通过精密度、稳定性、重现性、回收率等试验评价了苦荞及其制品中总黄酮常用的检测方法，并探讨应用于苦荞酒中总黄酮含量测定的可行性。同时，对影响苦荞保健泡酒中黄酮含量的两大因素(时间和固液比)进行了单因素试验，确定这两种因素对提高黄酮在白酒中溶出率的较适宜范围。结果表明，该方法应用于苦荞酒的检测时有较好的精密度、稳定性、重现性和回收率，变异系数分别为3.30%、3.26%、1.81%、3.36%，说明该法同样适用于苦荞酒中总黄酮含量的测定，并采用此方法确定苦荞浸泡酒(55%，V/V)最佳浸泡时间为10 d，最佳固液比为1∶20。

　　关键词：苦荞浸泡酒;总黄酮;溶出率

　　苦荞麦是蓼科荞麦属的植物，为我国特有的荞麦品种，主产于大凉山2 000 m以上的高寒山区，是一种药食两用植物[1，2]。现代科学研究证明，苦荞麦具有很高的营养价值，并含有其他谷物所不含有的黄酮类物质，苦荞黄酮具有降血脂、降血糖、抗氧化、抗癌等多种功效。随着人们对苦荞黄酮化合物研发的深入，其营养价值和药用价值越来越受到关注[3，4]。黄酮在水中的溶解度较小，而在乙醇中有较高的溶解度，因此苦荞保健酒，有效地提取了苦荞的功能成分，具有较高的营养保健作用，是一种低度、高营养的保健品，经常适量饮用苦荞酒可防毛细血管的脆性和渗透性出血，预防糖尿病、高血脂、冠心病、风湿病等，并且有强筋骨、健脾胃、祛风湿、壮肾气之功效[5-7]。

　　目前，苦荞麦中总黄酮含量的测定通常采用中华人民共和国农业部发布的标准[8]，该标准采用分光光度法只针对荞麦及其制品中的总黄酮含量的测定，未包括苦荞浸泡酒中总黄酮含量测定。本研究综合相关测定方法[9-12]应用于苦荞浸泡酒中黄酮含量的测定，通过精密度、稳定性、添加回收率试验，最终建立了苦荞浸泡酒中总黄酮含量的测定方法，旨在为相关单位或企业在测定苦荞泡酒总黄酮含量时提供参考。同时，对影响苦荞浸泡酒黄酮含量的两大因素，即时间和固液比进行了单因素试验，确定这两种因素对提高苦荞中黄酮在白酒中溶出率的较适宜范围，为人们日常生活中泡制苦荞保健酒提供参考[13，14]。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 原料与试剂 航飞维苦荞茶(西昌航飞苦荞科技发展有限公司);野荞神清香型白酒(55%，V/V; 西昌航飞苦荞科技发展有限公司)。芦丁标准溶液(国家标准物质中心)，甲醇、三氯化铝、乙酸钾均为分析纯(国药集团上海试剂公司)。

　　1.1.2 仪器设备 电热鼓风干燥箱(北京市永光医疗仪器厂);ESJ210-4B型电子天平(沈阳龙腾电子有限公司);722G型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司)。

　　1.2 苦荞泡酒中黄酮测定方法的评价

　　1.2.1 苦荞泡酒的制备方法 称取2.0 g的苦荞茶，置于150 mL三角瓶中，加入白酒50 mL，常温下放置10 d，过滤后的滤液即为苦荞浸泡酒，设置3个重复。吸取1.0 mL浸泡酒置于10 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，摇匀，静置30 min，待测。

　　1.2.2 标准曲线的绘制方法 用移液管吸取20 mg/mL 芦丁标液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分别置于 50 mL 容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化铝溶液和3 mL 1.0 mol/L 乙酸钾溶液，用70%的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，静置30 min。同时作空白对照。标准曲线中芦丁质量浓度分别为0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL。在波长420 nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标、芦丁质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到的标准曲线线性关系良好，回归方程为：y=0.006 4-0.001 5x(R2=0.997 9)。

　　1.2.3 总黄酮含量的测定方法 吸取苦荞泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L三氯化铝溶液2 mL，1 mol/L 乙酸钾溶液3 mL，用70%的甲醇溶液定容至10 mL，摇匀，放置30 min，在420 nm处测定其吸光值。依据上述标准曲线，得出总黄酮的浓度值。

　　1.2.4 苦荞泡酒中总黄酮含量的计算方法 苦荞酒中总黄酮含量以芦丁的质量计，稀释倍数数值以V表示，按公式计算。

　　w= C·V/1000

　　式中，C为由标准曲线计算得出的总黄酮浓度，mg/mL;V为总稀释倍数。

　　1.2.5 精密度试验 吸取浸泡酒1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L 三氯化铝溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸钾溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，摇匀，静置30 min，连续测定吸光度5次，计算出泡酒中黄酮含量。

　　1.2.6 稳定性试验 吸取浸泡酒1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入2 mL 0.1 mol/L 三氯化铝溶液和3 mL 1 mol/L 乙酸钾溶液，用70%的甲醇溶液定容，摇匀，静置30 min。分别在放置0、15、30、45、60、90 min时测定其吸光度，计算出泡酒中黄酮含量。

　　1.2.7 重现性试验 分别吸取浸泡酒1.0 mL 5份，于10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 三氯化铝溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸钾溶液 3 mL，用70%的甲醇溶液定容，摇匀，静置30 min，测定其吸光度，并计算出苦荞酒中黄酮含量。

　　1.2.8 回收率试验 分别吸取浸泡酒样品1.0 mL 5份，置于10 mL容量瓶中，再准确加入1 mL芦丁标准溶液(1.0 mg/mL)，同样0.1 mol/L 三氯化铝溶液 2 mL和1 mol/L 乙酸钾溶液 3 mL，70%甲醇溶液定容，摇匀，静置30 min，测定其吸光度，计算出浸泡酒中黄酮含量。